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第三节 抗体检查及配合性试验（第5页）

（2）不含有意外抗体的血清。

（3）只凝集集酶处理的RH阳性红细胞，不凝集未处理的RH阳性红细胞的抗D血清。

（4）抗FYA血清。

（5）D及FYA均阳性的红细胞。

2．方法

（1）1份无花果酶贮存液加9份PH7。3PBS。

（2）标记3个试管：5MIN，10MIN，15MIN。

（3）在每一个试管中加等量的洗涤红细胞和0。1%无花果酶。

（4）混匀，并在37孵育一定时间，如果先制备15MIN管，接着每隔5MIN制备10MIN和5MIN管，那么3支试管将在同一时间完成孵育。

（5）用大量盐水立刻洗涤红细胞3次。

（6）用盐水将处理的细胞配制成2%-5%。

（7）标记四只试管：未处理的，5MIN，10MIN，15MIN。

（8）在四只试管中各加入2滴血清。

（9）在标记好的试管中各加入1滴红细胞悬液。

（10）混匀，37孵育15MIN。

（11）离心，轻轻地重悬细胞扣检查凝集。

（12）用盐水洗涤细胞3或4次，进行间接抗球蛋白试验。

3．解释以下显示D阳性，FYA阳性细胞试验的结果（表12-3）。

最佳孵育时间可能是10MIN；只孵育5MIN时FY（A）活性消失不彻底或抗D活性没有提到最高；孵育15MIN，引起免疫学上假阳性的反应，血清产生抗球蛋白假阳性反应。假如孵育5MIN证明细胞处理过度，则使用较稀的酶应用液比减少孵育时间要好。因为确定和控制相当准确的短孵育时间是困难的。在追加试验中可以选择单一稀释度来研究不同孵育时间的影响，或者可以选择单一孵育时间来研究不同稀释度的影响。

（三）评价处理的红细胞

在使用处理过的红细胞之前，要证实这种酶处理是合适的而不是过度的，假如细胞能和只与未处理的红细胞产生抗球蛋白反应的抗体发生凝集则证明处理是适宜的。

（1）选择一种抗体，它与酶处理的有相应抗原的细胞凝集，但只与未处理细胞发生抗球蛋白反应，病人血清中抗D抗体的许多样本是以这种方式表现的。

（2）在1支标记为“阳性”的试管内，加入2滴含抗体的血清。

（3）在1支标记为“阴性”的试管内，加入2滴不含抗体的血清。

（4）各加1滴2%酶处理的细胞悬液。

（5）混合，并在37孵育15MIN。

（6）离心，轻轻将细胞悬浮。

（7）在显微镜下检查凝集。

在“阳性”管内应该有凝集而在“阴性”管内不该有凝集，如在“阴性”管内发生凝集，则细胞处理过度，如在“阳性”管内不发生凝集则处理是不适宜的。

（五）酶的一步法

（1）取受检者血清2滴置于试管中。

（2）加入2滴2%-5%试剂红细胞悬液。

（3）加入2滴无花果酶溶液，混匀。

（4）37孵育30MIN。

（5）离心，将细胞轻轻重新悬浮，并观察凝集反应，记录结果。

（6）如需要可进一步作抗球蛋白试验。

（六）酶的二步法