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第三节 抗体检查及配合性试验（第4页）

2．方法

（1）分别加入1滴2%-5%红细胞悬液，用盐水洗涤4次，每次倾斜盐水要沥干，立刻在一个试管中加入1滴或2滴多特异性抗球蛋白试剂，在另一个试管中加1-2滴牛白蛋白。

（2）混合，离心检查细胞凝集轻轻摇起读取结果。

（3）用多特异性抗球蛋白或抗C3试验，如不凝集置室温5MIN，再离心观察结果，如为阳性，是补体的反应结果。室温孵育能增强补体检测的灵敏度，但是孵育后不能替代立即离心的结果，因为孵育后IGG致敏细胞的反应会变弱。

（4）如室温孵育，仍是阴性，要在反应试管中加1滴IGG致敏的红细胞，混匀后立即离心，观察结果，如对照细胞阳性，上述阴性结果可靠，如对照细胞阴性，则阴性结果不可靠，可能是洗涤不成功，或抗球蛋白试剂失效。

3．解释

（1）无论是立即离心或室温孵育后离心，如发生凝集反应，则DAT阳性，IGG致敏的红细胞通常立刻反应，而补体致敏的红细胞可能孵育后比较容易证实，这个区别不能可靠地证实致敏球蛋白的性质，可用单特异性抗球蛋白试剂进一步证实存在哪一种球蛋白。

（2）立即离心或室温孵育后均不凝集，加入IGG致敏红细胞产生凝集反应的则为DAT阴性，如加入的球蛋白致敏的红细胞不发生凝集反应，阴性的DAT结果是不可靠的，试验必须重做。阴性的DAT并不意味着红细胞上没有结合的球蛋白分子，多特异性抗球蛋白和抗IGG试剂能检测到的最少量为每个红细胞致敏200-500个IGG分子，但是当IGG致敏低于这水平时，也可能患自身免疫性溶血性贫血。

（3）测定管与6%牛白蛋白管都阳性，将不能解释试验结果。

（三）用凝胶凝集技术进行直接抗球蛋白试验

1．原理在凝胶试验中，用特制的微量试管代替普通试管，试管内加入胶体介质，含有抗球蛋白的试剂，凝胶颗粒具有分子筛作用。通过离心，不凝的红细胞穿过试管到达底部，而凝集的红细胞仍悬浮在凝胶颗粒中，试验所测红细胞不用洗涤，试验阴性时也不需加抗IGG致敏对照细胞。

2．血样最好使用抗凝血

3．方法

（1）挑选抗IGG凝胶卡，检查每块凝胶卡以确保无干涸且完整。在卡上作标号，每一个样品一个微量管。

（2）配制0。8%受检者的红细胞悬液，备用。细胞不用洗涤。

（3）从微量管上除去铝封。

（4）将50UL受检者红细胞加入标记的微量管，加入前的红细胞悬液应是混匀的。

（5）用凝胶试验专用离心机离心。

（6）观察结果。

4．解释

（1）细胞完全沉积在微量管底部为阴性结果。

（2）所有细胞仍留在微量管顶部为强阳性结果。

五、酶技术

（一）原理

用于血库酶制剂批与批之间均有差异，所以每次配制酶贮存溶液都需要测定其活力，为达到最佳效果，确定标准的孵育时间。

1．材料

（1）干粉状酶（无花果蛋白酶）。

（2）磷酸缓冲液。

（3）玻璃制品。

2．方法

（1）将1G无花果蛋白酶倒入100ML容量瓶中，操作时须仔细，因为吸入或进入眼内部是有害的，最好戴上手套，口罩，围裙或在通风橱内工作。

（2）加入PH7。3PBS至100ML，溶解无花果蛋白酶，倾斜混匀至大部分溶解（不会完全溶解）。

（3）离心或过滤后，收取上清液，分小瓶，-20保存（不能反复冻融）。

（二）酶的鉴定

每个新批号的贮存液需确定其最佳稀释度和孵育时间。

1．试剂

（1）无花果酶PBS贮存液，PH7。3。