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第三节 抗体检查及配合性试验（第6页）

（1）在1ML无花果蛋白酶溶液中加入9MLPH7。3PBS来配制0。1%无花果蛋白酶溶液。

（2）在1份洗涤过的压积红细胞中加入1份0。1%无花果蛋白酶溶液。

（3）在37孵育15-30MIN（时间是经过测定对此酶溶液是最适宜的，参见酶的标准化）。

（4）用大量盐水将处理的红细胞至少洗3次，在盐水中将细胞配成2%-5%。浓度。

（5）在标记好的试管内加入2滴血清。

（6）加1滴2%-5%酶处理的红细胞悬液。

（7）混合，37孵育30MIN。

（8）离心，轻轻悬浮红细胞，观察凝集反应。

（9）如需要可进一步做抗球蛋白试验。

（七）血清学实验中常用的酶制剂

1．无花果蛋白酶（巯基内切蛋白酶）无花果蛋白酶能使赖氨酸、丙氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸、亮氨酸、缬氨酸残基的肽键水解。

使用方法：

（1）1%无花果蛋白酶贮存液制备：100ML0。1MOLLPH7。3PBS中溶解1G无花果蛋白酶。可分小包装，-20冰冻保存。

（2）0．1%应用液制备：1份贮存液+9份PH7。3PBS。

（3）1份洗涤的2%-5%红细胞悬液与1份0。1%无花果蛋白酶溶液37孵育15-30MIN，用盐水洗涤红细胞配制成2%-5%红细胞悬液。

（4）酶的二步法必须根据每一批新的贮存液决定最佳稀释度和孵育时间。按规定进行以下试验：①检查增强作用：处理的红细胞与弱RH混合抗体的试验。②检查抗原破坏：处理前后红细胞与抗FYA（优先）或抗M试验。

2．胰蛋白酶溶液的制备：胰蛋白酶能使精氨酸和赖氨酸羧基端的肽键水解。

使用方法：

（1）胰蛋白酶溶液的制备：每毫升0。067MOLLPH7。7PBS中+2。5MG结晶状胰蛋白酶。

（2）1份洗涤的压积红细胞与4份胰蛋白酶溶液37孵育30MIN，用PBS洗涤红细胞至少3次。

3．胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶能使色氨酸、酷氨酸、苯丙氨酸残基的肽键水解。

使用方法：

（1）胰凝乳蛋白酶的制备：每毫升0。067MOLLPH7。7PBS中+5MG结晶胰凝乳蛋白酶。

（2）1份洗涤的压积红细胞与4份胰凝乳蛋白酶溶液37孵育60MIN，用PBS洗涤红细胞至少3次。

4．木瓜酶DTT（称ZZAP）木瓜酶和DTT组合能切开结合在红细胞上的IGG及带有血型抗原的某些红细胞成分的二硫键和肽键。木瓜酶DTT能用于直抗阳性的红细胞定型，如果DAT能变为阴性即IGG被破坏或除去的结果。

使用方法：

（1）制备ZZAP试剂：2。5ML0。2MOLLDTT+0。5ML1%酶溶液+2。0ML0。1MOLLPH7。3PBS。

（2）1洗涤的压积红细胞与2份ZZAP37孵育30MIN，用盐水洗涤红细胞3次。可用于抗体检查、鉴定或吸收试验。

5．链霉蛋白酶蛋白酶混合物能水解约80%卵清蛋白间的肽键。

使用方法：

（1）链霉蛋白酶溶液的制备：每亳升0。067MOLLPH7。7PBS中+2。5MG链霉蛋白酶。

（2）1份洗涤的压积红细胞与4份链霉蛋白酶溶液37孵育30MIN，用PBS洗涤红细胞至少3次。链霉蛋白酶要使一些抗原减弱或破坏：LW（A），LW（AB），YT（a），GE（2），GE（3）。

（八）酶制剂对抗原的影响

（1）尽管酶可能除去抗原的一部分，但一些以碳水化合物结构为代表的抗原（ABO，P1，LEWIS，H，I，STA等），红细胞处理后的凝集作用可以不变或是增强。位于特异性蛋白质上的抗原（RH，KIDD，DIEGO，KX，）也是如此。

（2）酶同样也能破坏或降低抗原活性，这时宁可选用抗球蛋白技术检测抗体。此处，还需注意，与酶处理红细胞反应的血清中可能还含有另外一种抗体。

酶处理红细胞凝集素：有一些抗体是针对酶处理红细胞的特异性抗体，能和酶处理的红细胞发生凝集，但不与未处理的细胞起反应，其原因尚不完全清楚，可能是酶处理后某些抗原部位得以暴露，且不同的酶暴露的部位不同，对于这类与酶处理红细胞才发生凝集的抗体可称为酶处理红细胞凝集素。它有以下几个特点：①抗球蛋白试验阴性或反应微弱。②常表现出为自身凝集或全凝集。③可以和其他的酶处理的细胞发生交叉反应，也可能不发生交叉反应。④偶尔有型特异性。⑤也可能表现为同种异体抗体特异性。⑥一些RH系统的抗体，尤其是抗E和抗C与木瓜酶处理的细胞反应强。⑦通常不引起输血反应。