笔趣三小说

第三节 抗体检查及配合性试验（第3页）

⑶方法：①如果待测的血清和血浆是冰冻保存的，血样在使用前需要离心，确保没有颗粒物质。

②挑选抗凝胶卡。检查每1个凝胶卡是否干涸，是否完整，做好试验标记，若是抗体筛选可选择2～3个微量管，抗体鉴定即需10个微量管。

③制备0。8%红细胞悬液。

④揭开凝胶卡的铝封。

⑤在不同的微量管中，分别加入50ul不同的筛选或鉴定试剂红细胞。

⑥在这些微量管中加入25ul血清或血浆。⑦将凝胶卡置37℃凝胶孵育箱15min。⑧用凝胶试验离心机离心。⑨观察结果。

⑷解释：①细胞完全沉积在微量管底部为阴性结果。

②所有细胞仍留在微量管顶部为强阳性结果。

三、Polybrene试验

1。原理聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基因，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝集。这种凝集是可逆的，当红细胞与血清在低离子介质孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在凝聚和凝集外表上是不能区分的，再加入枸橼酸钠重悬液，使枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上的正电荷中和，重悬后，凝聚现象消失，而真正存在的凝集不消失。

2。试剂

⑴低离子介质（LIM）：在500ml容量瓶中，加入25g葡萄糖和1gA-H2O，用蒸馏水稀释至500ml。

⑵溶液：①贮存液（10%WV）：称5gPolybrene，用生理盐水稀释至50ml放入塑料容器中置1～6℃保存。

②应用液（0。05%WV）：取0。1ml贮存液与19。9ml生理盐水混合置塑料容器中于1～6℃保存。

③重悬液：0。2molL枸橼酸三钠称5。8gNa3C6H5O7。2H2O加入100ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度；5%葡萄糖；重悬液应用液：60ml0。2molL枸橼酸三钠与40ml5%葡萄糖混合。

⑶洗涤液（用于抗球蛋白试验）。

⑷抗球蛋白试剂。

⑸IgG致敏红细胞。

3。方法

⑴各取1滴2%～5%受血者和献血者红细胞悬液，分别加入两试管，做好标记，受血者红细胞中加入0。1ml献血者血清，献血者红细胞中加入0。1ml受血者血清。

⑵各加1mlLIM溶液，混合，室温孵育1min。

⑶加0。1ml0。05%Polybrene应用液入每一个试管，混匀。

⑷900～1000g离心10s，不要悬浮细胞扣。

⑸加0。1ml重悬液，轻轻摇起观察结果，存在凝集为阳性反应，如果反应很弱，用显微镜观察并与阴性对照比较，不用离心。

⑹如果需要可按以下方法做抗球蛋白试验：①加0。05ml重悬液。

②用0。01molL枸橼酸三钠，洗涤液将细胞洗涤3次。

③加2滴抗IgG，混匀。

④离心15s，观察结果。

⑤在阴性使观众加入IgG致敏红细胞，离心后出现阳性结果则试验有效，否则无效。

四、直接抗球蛋白试验

（一）原理

直接抗球蛋白试验是用来检测体内被抗体或补体致敏的红细胞，用抗球蛋白试剂直接测定患者或献血者洗涤过的红细胞。

（二）试管法

1．试剂和血样

（1）直接抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白试剂、抗IGG、抗C3。

（2）标本必须是EDTA抗凝标本，避免血液分离后被补体致敏，造成假阳性。

（3）6%牛白蛋白。