⑶混匀。
⑷离心,检查溶血或凝集。
⑸37℃孵育30~60min。
⑹离心,检查溶血或凝集。
⑺用盐水洗涤3~4次。
⑻加抗球蛋白试剂,混匀。
⑼离心观察反应结果。
⑽阴性反应试管加IgG致敏红细胞,证实实验有效。
2。白蛋白(或加Liss)间接抗球蛋白试验
⑴、⑵、⑶同盐水间接抗球蛋白实验。
⑷加等量22%或30%白蛋白或添加。
⑸37℃孵育15~30min。
⑹离心,检查溶血或凝集。
⑺、⑻、⑼、⑽同盐水抗球蛋白实验。
3。Liss间接抗球蛋白试验
⑴将受血者,献血者红细胞用生理盐水洗涤3次。
⑵用Liss配制2%红细胞。
⑶标记主侧管加入受血者血清2滴,献血者2%Liss红细胞悬液2滴。
⑷标记次侧管加入献血者血清2滴,受血者2%Liss红细胞悬液2滴
⑸混匀,37℃孵育15~30min。
⑹离心,轻轻悬浮红细胞扣,检查溶血和凝集。
⑺、⑻、⑼、⑽同盐水抗球蛋白实验。
3。间接抗球蛋白试验
⑴在所需测定的试管中加2滴血清,4滴20%Liss(市场上有添加剂可按说明说使用),1滴红细胞悬液。
⑵37℃孵育15~30min。
⑶不用离心。
⑷用盐水洗涤4次。
⑸加抗IgG试剂。
⑹同盐水抗球蛋白实验。
4。间接抗球蛋白试验的解释
⑴37℃孵育后,存在溶血和凝集为阳性反应。
⑵加入抗球蛋白的试剂后存在凝集为阳性反应。
⑶离心后,未出现凝集加IgG致敏红细胞出现凝集为阴性反应。
⑷如不凝集,阴性结果不可靠,实验需重做。
5。用凝胶凝集技术筛选和鉴定抗体
⑴原理:在凝胶试验中,用特制的微量试管代替普通试管。试管内注入胶体介质,含有抗球蛋白的试剂,凝胶颗粒具有分子筛作用,通过离心,不凝集的红细胞穿过试管到达底部,而凝集红细胞仍然悬浮在凝胶,试验细胞不需洗涤。阴性结果试验中,不需加IgG致敏红细胞。凝胶卡的设计使标记方便而且多个样品可同时检测,极大地提高了准确性和工作效率。
⑵血样:血清和血浆均可使用。