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第二节红细胞定型（第6页）

⑵抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白或抗IgG。

⑶IgG致敏红细胞。

⑷2%～5%受检者的红细胞。

（三）方法

如果最初的抗D试验是采用试管法，同一试管可直接用于变异型D和不完全D试验（根据厂家说明），在这种情况下，操作可直接进行到下列程序的第4步。

⑴在1支标记的干净试管中加入1滴抗D血清。

⑵在第2支试管中加入1滴合适的对照试剂。

⑶在2支试管中各加入1滴2%～5%受检者的红细胞悬液。允许使用直接抗球蛋白试验作变异型D和不完全D试验对照，因为这样能涉及到引起假阳性结果的所有成分。

⑷混匀，并在37℃孵育15～30min（根据厂家的说明而定）。

⑸900～1000g离心15～45s。

⑹轻轻重新悬浮细胞扣并观察凝集反应，如受检红细胞与抗管凝集而与对照管不凝集，可记录受检样本为阳性结果，不必作抗球蛋白试验。

⑺如不凝集，则用大量盐水洗涤细胞3～4次。

⑻最后一次洗涤后，把盐水倾倒干净，吸干试管边缘，加1～2滴抗球蛋白试剂（根据厂家说明）。

⑼轻轻混匀，并以900～1000g离心15～30s。

⑽轻轻冲洗悬浮细胞扣并观察凝集反应。

⑾如果试验为阴性，加入已知IgG致敏红细胞，再次离心，检查凝集。

（四）解释

⑴做变异型D和不完全D试验时，必须同时做试剂对照试验或直接抗球蛋白试验，抗试管出现凝集而对照管无凝集时，是阳性结果，判为Rh阳性;而报告成“D阴性，弱D阳性”或”D阴性，变异型D和不完全D型”是不正确的。

⑵抗D试管无凝集反应者是阴性结果，表明细胞没有没有D活性，为Rh阴性。

⑶如果试剂对照管凝集，将不能对这次变异型D和不完全D试验作出有效的解释。在这种情况下，对预期受血者应输给Rh阴性血液；如果受检细胞是献血员，这血液不应该用于输血。

⑷抗球蛋白试验产生假阳性和假阴性结果的原因可参见抗球蛋白试验章节。

七、直接抗球试验阳性红细胞定型

（一）原理

当红细胞被抗IgG体大量包被时，用抗球蛋白反应血清作试验是困难的，用高蛋白质的抗血清作试验不可能。为进行Rh定型而把抗体从细胞表面解离下来且不损伤红细胞完整性或改变其抗原活性是必要的，其放散方法与试图恢复活性抗体的放散方法是不同的。为证明放散没有损伤抗原活性，平行处理一份未被包被的，有适当抗原的正常细胞是重要的。

（二）方法

⑴将1份洗涤的压积的抗体包被的细胞和3份生理盐水加入1支适当大小的试管内，在另1支试管内，加入等量洗涤压积相应抗原阳性的红细胞，这是为了证实放散技术没有破坏抗原活性。

⑵在45℃左右孵育10～30min，孵育时间应该与抗体包被程度大致成比例，如同抗球蛋白反应的强度所指示的一样。

⑶离心，去除上清液。

⑷用对比已处理细胞的直接抗球蛋白试验结果和未处理细胞的抗球蛋白试验结果来检验抗体的去除量，如包被抗体减少，但仍然存在，则重复步骤（1）～（3），对照细胞反应条件应相同。

⑸用低蛋白Rh抗血清检定已处理的红细胞。

（三）注释

⑴如处理过的细胞用抗血清试剂（通常是抗D）试验时，没有出现凝集反应，则需证明处理过的细胞没有丧失一切抗原活性，显然应该与试剂对照平行，用抗c或抗e检验D阴性细胞，如细胞没有被其中之一的抗血清凝集，则检定的D阴性结果是可疑的。

⑵如果可使用IgM单克隆试剂，就不一定使用这种方法，但作定型试剂时，必须使用充分洗涤的红细胞悬液。