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第三节血清学检查（第1页）

第三节血清学检查

血型血清学检查对HDN的诊断有重要意义。通过血清学检查可了解母婴血型是否不合，母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的IgG抗体，患儿红细胞是否被来自母亲的IgG抗体所致敏。

一、母婴ABOHDN血型血清学检查

1．母亲血清中IgG抗A（B）检查ABO血型系统HDN由IgG抗A（B）引起，检测母亲血清中有无IgG抗A（B）抗体及其效价，即可预测ABO血型系统HDN发生的可能性。正常人血清中的抗A（B），一般多为IgM和IgG抗体的混合物，当IgM抗A（B）抗体效价等于或大于IgG抗A（B）抗体时，则IgG抗A（B）抗体被其掩盖，因为它们具有相同的特异性，因为无法检出IgG抗A（B）抗体，必须除IgM抗A（B）抗体。应用2-巯基乙醇（2-ME）可以打开IgM型抗体重链之间的二硫键，使之不能再与相对应的红细胞发生凝集。当母亲血清中IgG抗体效价》64，其血型不合胎儿就可能发生ABO新生儿溶血病。应用达亚美微术凝胶卡检测母亲血清IgG抗体效价，操作步骤如下：

（1）配制中和血清。取母亲血清、二巯基乙醇液各200ul，充分混匀。

（2）将上述中和血清置37℃水浴30分钟，以充分破坏血清中的IgM类抗体。

（3）取6支干净试管排于试管架上。

（4）第1管加50ul中和血清和达亚美2号稀释液350ul。

（5）第2-6管分别加入达亚美2号稀释液200ul。

（6）从第1管吸出200ul**，加入第2管，混匀，再从第2管吸出200ul**，加入第3管混匀，依次倍比稀释。

（7）取达亚美LISSBS卡（一卡六管）1张，撕去铝箔，在达亚美LISSBS卡的六管中，各加入父亲0。8%的红细胞悬液50ul。

（8）从第1-6管中，各取出25ul**，分别加入达亚美，LISSBS卡的六管中。

（9）将加好血样的达亚美LISSBS卡置于达亚美孵育器内，孵育15分钟。

（10）将孵育好的LISSBS卡置于达亚美离心机内，离心10分钟。

（11）判断结果，第1-6管的IgG抗体效价依次为：1：6；1：32；1：64；1：128；1：256；1：512。

2．婴儿及父母的ABO血型鉴定婴儿及父母的ABO血型的鉴定是检查新生儿溶血病的必要试验。

3．患儿血样检查诊断ABO新生儿溶血病最有力证据是证实患儿红细胞被来自母亲的IgG抗A（B）抗体所致敏。

（1）患儿红细胞直接抗人球蛋白试验：如果患儿红细胞已被IgG抗A（B）抗体所致敏，则直接抗人球蛋白试验应得到阳性结果，但由于ABO新生儿的A（B）抗原数量较少，所以被结合的抗体亦很少，呈弱阳性的混匀视野外观或阴性结果，如果选用敏感性强的微柱凝胶卡做直接抗人球蛋白试验，可以大大提高其阳性率，方法如下：

1取患儿血液，离心，取压积红细胞，用达亚美2号稀释液（ID-KILUENT2）配成0。8%的红细胞悬液；

2在LISSBS卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔；

3加入50ul上述红细胞悬液；

4在达亚美离心机上离心10分钟；

5判断结果。

（2）患儿血清胆红素测定：患儿血清胆红素的高低，是衡量新生儿溶血病严重度的一个重要指标，以便决定是否需要换血。以改良J-G法为常用，如采用胆红素单项自动测定仪则更为方便。

一般认为在正常情况下，足月新生儿脐血胆红素（MW584。7）24小时＜102umolL（＜6mgdl）；48h＜128umolL（＜7。5mgdl）;3～7天＜205umolL（＜12mgdl）。未成熟新生儿24h＜136umolL（＜8mgdl）;48h＜205umolL（＜12mgdl）;3～7天＜256umolL（＜15mgdl）;超过这个范围作为病理性黄疸考虑。

（2）注意事项

1．患儿血清学检查时间的选择，用患儿脐血做上述3项试验，O型母亲分娩的A型或B型患儿有15为阳性，这样就把许多不发病的新生儿统计在内，如果把采血时间放到产后10天，所致敏的红细胞已大部分破坏，3项试验检出率降低，使真正的ABOHDN漏检，故采血宜在出生后3～7天。用3项试验检测ABOHDN阳性率为2。5%。

2．采血器具应洁净干燥，最好用一次性真空抽血管，防止溶血。