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第三节血清学检查（第2页）

3．新生儿血样本最好用脐带血。

4．采血样本如果暂时不能做，要随即分离血清。

一、RHHDN血型血清学检查

（一）产妇血清学检查

如果夫妇或母子的ABO血型不配合，测定项目同上述母婴ABO血型不合溶血病的血清学中母亲血样本的检查法；如果夫妇或母子的ABO血型不配合，则将产妇血清直接与其丈夫或婴儿的红细胞及抗体筛选细胞，采用盐水法，木瓜酶法，PEG-IAT法、凝聚胺法；如与筛选细胞和丈夫或患儿的红细胞均阳性，就需进一步与配组的谱细胞确定抗体的特异性。这样，就更应注意所用的配组红细胞必须包含尽可能多的血型抗原，以便检出少见的抗体。如果为了证实产妇血清凝集部分配组红细胞的抗体是否针对其丈夫红细胞，用吸收产好血清后的放散液，再与其表示该抗体与新生儿溶血病有关，否则表示该抗体与新生儿溶血病无关。

注意事项：

a）产妇和其丈夫或婴儿ABO血型配合者，须按上表内容检查，ABO血型不合者，产妇血清不直接与其丈夫、婴儿红细胞做试验。

b）为排除自身凝集，应做自身对照管（此管可在ABO定型试验时一起操作），如自身凝集，则需用受检者压积红细胞在4℃将自身血清中抗体尽量吸收后，再做试验。

c）在操作时可以先做盐水和木瓜酶法，如盐水法中不凝集，可做凝聚胺法或将红细胞洗涤3次后PEG-IAT试验。

（1）盐水法

1配组、丈夫或婴儿及自身红细胞，洗2次后配制成5%红细胞悬液；

2受检者血清1滴加对应红细胞悬液1滴，混匀，37℃水浴1小时后观察；

3如结果为阴性，说明产好血清中无针对配组、婴儿及丈夫红细胞上抗原的相应IgM抗体，该管可接着PEG-IAT或凝聚胺试验。

（2）间接木瓜酶法

1产妇血清1滴加盐水1滴，再加5%木瓜酶处理红细胞悬液1滴，37℃水浴5分钟，取出，1000rmin离心1分钟，肉眼观察结果；

2如产妇和丈夫或婴儿ABO血型配合者，可做直接木瓜酶法：产妇血清1滴加1%木瓜酶1滴，再加丈夫或婴儿5%红细胞悬液1滴，37℃水浴1小时后，肉眼观察结果。

&法：取产妇血清1滴，加入相应5%红细胞悬液1滴，再加3%PEG溶液2滴，混合后置37℃水浴中5分钟，然后用生理盐水洗涤3遍，加抗人球蛋白试剂1滴，混匀，3600rmin，离心15秒，取出观察结果。

（4）凝聚胺法：取产妇血清1滴，加低离子介质溶液0。6ML，室温孵育1分钟，完成致敏相；再加凝聚胺试剂1滴，中和红细胞上的负电荷，使红细胞靠拢，便于凝集；最后加假凝集清除剂1滴，仅保留真正的凝集。3种试剂加完后，在1分钟内观察结果。

（5）RH抗体效价测定：当产妇血清中检出某种RH抗体时，应选择适当的对象红细胞和适合的试验方法进一步测定其效价。如需在不同时间内测定产妇抗体时，必须选用同一对象红细胞和相同的方法，以便比较。如RH抗体效价＞64时，其血型不合胎儿的死胎率增高，效价在＜16时，其血型不合胎儿的溶血病一般较轻。

（二）婴儿血清学检查

如果RH血型系统HDN的下述3项试验为阳性，即可证实婴儿的红细胞被来自母亲的IgG抗体致敏。

（1）直接抗人球蛋白试验：患儿红细胞的直接抗人球蛋白试验常呈阳性，即使是轻症的溶血病也是如此，如用完全抗体来检查患儿的RH血型，结果可能是假阴性，因患儿红细胞上的抗原已被不完全抗体占据，不能再与完全抗体结合，此为“遮断现象”。

（2）抗体放散试验：对致敏抗体宜采用化学提取法，即乙醚法提取，提取的抗体可再用配组的谱细胞确定其特异性。如此项试验阳性，就可直接确诊为由免疫抗体所致的溶血病。

（3）游离抗体试验：如患儿血清与配组的谱细胞反应以检测不规则抗体的存在时，由于来自母体的IgG抗体大部分被患儿红细胞所吸除，因此将高于血清中抗体的量常不多，甚至阴性，特别是当抗体效价不是很强是尤其如此。因此RH血型系统HDN的血清学检查常采用直接抗人球蛋白试验和抗体放散试验，如果2项试验结果为阳性，即能确定其免疫抗体的类型。

二、患儿输血的血型选择及配血试验

a）ABO血型系统HDN患儿输血不能输同型血，应选用O型浓缩红细胞加AB型血浆，或加5%人血白蛋白溶液。

b）RH血型系统HDN患儿输血或换血的血型选择原则是ABO血型同患儿，RH血型同母亲；若ABO血型系统HDN兼RH血型系统HDN时，应选项用不与该RH抗体反应的O型红细胞加AB型血浆或人血白蛋白液。

c）配血试验，RH血型系统HDN患儿所具有的抗体都来自母亲，而且抗体含量总是低于母亲血清中的量，又大部分抗体被吸附在患儿红细胞上。因此，当母、婴的ABO血型配合时，采用母亲血清作主侧配血试验（盐水法、酶法、抗人球蛋白试验），当母、婴的ABO血型不配合，患儿血清游离抗体试验又为阴性时，应以患儿的红细胞放散液代替血清作主侧配血。当患儿红细胞的直接抗人球蛋白试验为阳性时，次侧配血试验阳性不作配血禁忌考虑，只要求主侧配合即可。