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第七节简易致敏红细胞血小板血清学试验SEPSA（第1页）

第七节、简易致敏红细胞血小板血清学试验（SEPSA）

1．SEPSA应用范围可用于鉴定血小板抗原，检测血小板同种、自身和药物信赖性抗体及血小板表面相关抗体，也可用于血小板交叉配血试验，为受血者选择配合的血小板供体。该方法操作简单、微量、重复性、特异性和敏感性均较理想，固相化的血小板及抗IgG指示的细胞能长久保存备用，对批量检测方便。适合于广泛开展血小板抗原、抗体、ITP等自身或同种免疫性血小板减少性紫癜的诊断、治疗、发病机制的研究，以及开展配合性血小板输注。

2．SEPSA方法学原理SEPSA试验在U形孔微量反应板上进行，将血小板抗原固定在U形孔壁上，与被检血清在低离子溶液中反应后洗净，以抗IgG指示细胞指示反应结果。如果血小板上结合了抗血小析抗体，则致敏在指示细胞上的抗IgG与血小板抗体结合，指示细胞向孔底移动被阻止，广泛覆盖在固定的血小板单层上，为阳性结果；血小板上无抗血小板抗体，则指示细胞向孔底移动不受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为阴性结果。

3．方法

（1）直接测定法（血小板表面结合抗血小板抗体的测定）：受检者血小板固定于反应孔底，加入25μl抗IgG致敏红细胞，反应板置于湿盒内，室温静置3小时以上或次日观察结果。

（2）间接测定法（血清内抗血小板抗体测定）：弃去固相化血小板孔内的生理盐水，各孔加入受检血清（可稀释为1：1、1：2、1：4、1：8、1：16）25l，并加入LIM（低离子溶液）pH值6。7l，置湿盒37℃孵育30分钟，再用pH值7。2，0。05%吐湿PBS洗涤5次，各孔加入pH值7。2，0。05%吐温PBS25l及抗IgG指示细胞25l，室温湿盒静置3小时以上或次日观察结果。

（3）交叉配血试验（选择配合的血小板供体）：将所需筛选的献血者血小板分别在反应板孔中固定后，把受检者血清25l加入各孔中，并加入LIMpH值6。7，25l，置湿盒37℃30分钟孵育，然后用pH值7。2，0。05%吐温PBS洗涤5次，各孔加入25l抗IgG（IgM）指示细胞。反应1小时后，2000rmin离心10分钟，观察结果期。选择反应阴性的血小板为献血者，给受者输注。

（4）质量控制：每次试验均做阴性、阳性对照以进行质量控制，在间接法中，以正常人AB血清为阴性对照，已知阳性血清为阳性对照；在直接法中，以正常人血小板为阴性对照，已知阳性血小板为阳性对照，被检血小板必须重复测定2个孔。