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第六节凝集抑制试验（第1页）

第六节凝集抑制试验

抗体能与有相应抗原的红细胞发生特异性凝集，体液中的可溶性抗原物质能与该抗体发生特异性中和，抑制了抗体凝集红细胞的作用。用这种可溶性物质来抑制抗体与红细胞凝集作用的试验，为凝集抑制试验（agglutination-inhibitio）。常用于ABH或Lewis分泌状态的检查，帮助ABO亚型的确定，以及特殊情况下（如红细胞标本完全溶血）ABO血型的鉴定。偶尔也用于Chiders表型的测定，Chiders，Lewis和Sd抗体的鉴定。现以ABH物质测定为例介绍凝集抑制试验。

一、唾液收集

用做ABH物质测定的标本可以是唾液（saliva）、血清、血浆、尿液、羊水，以及胃液等。唾液的ABH物质含量较为丰富，采集方便，常以唾液为标本。

用一小烧杯或大口试管收集成人从舌下渗出的唾液5～10ml，注意不能取吐液。有困难的供者可以通过启发如“谈梅生津”等，或令其咀嚼石蜡或橡皮条，刺激其唾液渗出。对于婴幼儿可将棉试子置于舌下5～10分钟，用镊子将唾液挤压于0。5ml生理盐水中。困难严重的婴幼儿可取尿液。

二、唾液处理

将有盛有唾液的烧杯或试管尽快置沸水中煮10分钟，灭活一些能破坏血型物质的酶和唾液中的抗A，抗B。重离心10分钟，移出澄清或微乳白上清液，短期内使用可放置4℃保存；-30℃以下保存，抗原性可数年不变。

三、抗血清标化

在中和过程中，如抗体含量很高，唾液中血型物质较少，检测不出中和作用，需要预先对所用抗体进行标化，适当稀释，使其在血型物质较少的情况下能显示中和作用。根据实验需要选择相应抗体，如测O型人是否属于分泌型，选择抗H；测A型人选抗A和抗H；测B型人选抗B和抗H；测AB型人选抗A，抗B和抗H；测定未知血型也要3个抗体。具体方法如下：

（1）将已知抗体从1：2作连续倍比稀释至1：256，稀释容量为0。1ml。

（2）各管加制备好的已知非分泌型人唾液0。1ml。

（3）各管加5%的相应红细胞盐水悬液0。05ml，立即离心看结果。

（4）以出现“2+”凝集强度的最大稀释比例，将所用血清进行稀释。

四、试验方法

（1）在小试管中置已标化的抗体0。1ml。

（2）加制备好的待测唾液0。1ml，置室温中和30分钟。

（3）加5%的相应红细胞盐水悬液0。05ml，立即离心读取结果。

（4）同时用已知非分泌型唾液做阴性对照，用已知分泌相同血型物质的唾液做阳性对照。

（5）结果判定阳性对照应不凝集，阴性对照呈2+的凝集，试验结果才可靠。实验结果同阳性对照为阳性，分泌血型物质。实验结果同阴性对照为阴性，不分泌血型物质。实验结果为弱凝集，表明血型物质较少，为弱分泌型。

这种试验方法还可以测定唾液中血型物质效价，具体方法是即将唾液用生理盐水作倍比稀释后做上述凝集抑制试验，一般也要设阴、阳性对照。