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第四节抗体效价与同种自身抗体的检测（第2页）

（1）PH7。3PBS

（2）保存

（3）2ml血清。

（三）方法

（1）在两个试管中分别加入1ml血清。

（2）一个试管标记对照管，加1mlPH7。3PBS。

（3）另一个试管加入1ml0。01MOLLDTT。

（4）混匀，37℃孵育。

（5）取实验用量加相应红细胞悬液，用间接抗球蛋白的试验方法与一般测效价相同，但要注意的是血清+DTT处理时已是1：2稀释了，计算效价时要加一个稀释度。

（四）解释

（1）也可使用2-ME处理血清，在我国大部分使用2-ME。

（2）如果对照管未见反应，表示抗体稀释，结果不可信。

三、同种抗体鉴定

（一）原理

同种抗体的鉴定广泛用于输血反应和新生儿溶血病的诊断与预防等方面。IgM分子量较大，在盐水介质中能直接相连相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集；IgG在盐水中不凝集而只能致敏相应抗原的红细胞，必须通过其他介质、酶法、低离子强度溶液法、抗球蛋白法、POLYBRENE法、凝胶法等血清学技术才能检出。

（二）试剂

（1）抗球蛋白试剂

（2）试剂红细胞。

（三）方法

常规抗球蛋白试验（间接法）。

（1）取受检者血清2滴，加2%～5%试剂红细胞1滴，37℃水浴30～60min。

（2）离心，观察溶血和凝集。

（3）用生理盐水洗涤3次。

（4）最后一次洗涤后弃去全部盐水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。

（5）加1滴抗球蛋白试剂，混合。

（6）离心，轻轻悬浮细胞，观察结果。

（7）如结果阴性，加IgG致敏红细胞1滴，离心并观察结果，如不凝集表示试剂无效，试验不可靠，必须重做。

（四）注意事项

（1）试验中，一般需要使用10个（或以上）细胞组成的细胞谱。

（2）根据需要选择吸收、放散试验。

（3）阴性试验不一定意味着血清中不存在抗体，而只是说明在使用这些技术时，缺乏与鉴定细胞起反应的抗体。

（4）抗体鉴定时，操作人员要进行多方法综合判断：1反应温度：低温性，37℃反应性。2媒介物：盐水不反应，用酶增强；酶法不反应，用抗球蛋白法增强。3细胞反应格局分析。4抑制类似血型物质：人的唾液：抗LE（A）；人的尿液：抗SD（A）；人的血浆：抗CH；其他的血型物质：P1。5自身抗体的否定：直接抗球蛋白试验阴性。6药物引起的抗体：用药史。7抗体的吸收，放散试验：复合或混合抗体。